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VDA
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CDA
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細胞增殖及毒性檢測試劑盒(CCK-8)增強型
總貨號: MA0218
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產品問答
問
CCK-8兩個波長都要測嗎？ 需要怎樣計算?
答
只測450nm下的OD值，細胞存活率 = [(As - Ab)／(Ac - Ab)] ×100%
抑制率 = [(Ac - As)／(Ac - Ab)] ×100%
As：實驗孔（含有細胞的培養基、CCK-8、待測藥物）的吸光度
Ac：對照孔（含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測藥物）的吸光度
Ab：空白孔（不含細胞和待測藥物的培養基、CCK-8）的吸光度
問
每次測定的數值不一樣，是什么原因？如何解決？
答
可能會有以下幾個原因：
1)當在培養箱內培養時，培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養基，不作為測定孔用。
2)有可能會因為CCK-8沾在壁上而產生誤差，建議在加入CCK-8后，輕輕敲擊培養板以幫助混勻。
3)每孔的細胞數量過多或過少。請預先在1,000~100,000個/孔范圍內摸索條件。
4) 重復試驗請保證孵育時間、接種細胞數相同。
問
CCK-8會導致細胞死亡嗎？
答
CCK-8本身對細胞毒性特別小，作用時間長不會導致細胞都死亡，但是細胞長滿了，本身代謝會引起細胞死亡
問
CCK-8除了用酶標儀還可以用什么儀器？紫外分光光度計行么？
答
一般cck都是用酶標儀，紫外分光光度計最好不用，因為紫外我沒記錯一次只能測一個孔吧，而且還得把孔內液體吸出來到紫外用的皿里，而且檢測時間很長，CCK-8對孵育時間敏感，這樣誤差太大了
問
OD值偏高？
答
可以確認下培養時間，一般肉眼可見顏色變化即可檢測
問
做CCK-8經常有氣泡，對吸光度有影響，有什么辦法去除么？
答
有氣泡，沒辦法去除，但是可以避免有氣泡，加藥什么的槍頭抵著孔壁，慢點加液體，基本不會產生氣泡
問
細胞能一邊培養一邊檢測？
答
培養一段時間測CCK-8，然后換液后可以接著養。
問
反映時間怎么確定？數值必須是1么？
答
0.1-2.5都可以，最佳是1.0左右
問
如何設定空白對照
答
在不含細胞的培養基中加入CCK-8，培養一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時，還應考慮藥物的吸收，可在不含細胞，加入藥物的培養基中加入CCK-8，培養一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。
問
鋪板細胞量有什么要求嗎？
答
96孔板細胞建議鋪板5000-10000個/孔；不同細胞類型接種密度不一致，客戶可自行摸索，我們鋪96孔板，一般密度5*10的4次方，取100ul；可以您自己對細胞計數，保證每孔細胞數量一致?；蛘呖梢杂嫈?，方法：按不同細胞數鋪板，貼壁后加CCK-8，孵育1小時，然后檢測，OD值在1.5左右是最佳鋪板數
問
哪些物質會影響CCK-8的測定？
答
當有氧化還原性物質存在時會影響CCK-8的測定，因此當所加藥物為氧化還原性物質時需要換液再進行檢測。
問
CCK-8對于不同的細胞，靈敏度是否一樣？
答
不一樣，懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞，一般加入CCK-8培養0.5-4小時吸光度已經很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。
Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8），是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
CCK-8試劑中含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在條件下，可以被線粒體內的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物Formazan （參考圖1），生成的Formazan數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析，細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。
CCK-8與以往的增殖/毒性測定試劑相比，具有明顯優點（參考表1）。美侖CCK-8試劑盒具有靈敏度高、反應時間短、線性范圍寬、數據可靠、重現性好等特點，可以廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
表1. 增殖/毒性測定試劑的比較
|
檢測方法 |
MTT法 |
XTT法 |
WST-1法 |
CCK-8法 |
|
甲瓚產物的水溶性 |
差（需加有機溶劑溶解） |
好 |
好 |
好 |
|
檢測靈敏度 |
高 |
很高 |
很高 |
最高 |
|
檢測時間 |
較長 |
較短 |
較短 |
最短 |
|
檢測波長 |
560-600nm |
420-480nm |
420-480nm |
430-490nm |
|
細胞毒性 |
高，細胞形態完全消失 |
很低，細胞形態不變 |
很低，細胞形態不變 |
很低，細胞形態不變 |
|
試劑穩定性 |
一般 |
較差 |
一般 |
很好 |
|
批量樣品檢測 |
可以 |
非常適合 |
非常適合 |
非常適合 |
|
便捷程度 |
一般 |
便捷 |
便捷 |
非常便捷 |
我司所售出產品僅供于科研研究用途（非臨床科研研究），每次銷售產品行為都適用于我司網上所列明的通用銷售條款。
英文名字：Cell Counting Kit-8
質量標準：Meilunbio
| MA0218-1 | Meilunbio(1ML*1瓶) |
| MA0218-2 | Meilunbio(5ML*1瓶) |
| MA0218-3 | Meilunbio(10ML*10瓶) |
| MA0218-5 | Meilunbio(10ML*1瓶) |
| MA0218-6 | Meilunbio(5ML*10瓶) |
摩爾濃度計算器
（本計算器可幫助您計算出特定溶液中溶質的質量、溶液濃度和體積之間的關系）
摩爾濃度計算公式：質量 (g) = 濃度 (mol/L) x 體積 (L) x 分子量 (g/mol)
質量（g）
=
濃度 (mol/L)
x
體積 (L)
x
分子量 (g/mol)
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